HCMV UL97 phosphotransferase gene mutations may be associated with antiviral resistance in immunocompromised patients in Belém, PA, Northern Brazil

Abstract INTRODUCTION: Human cytomegalovirus is one of the causes of opportunist infections in immunocompromised patients, and is triggered by factors such as state of viral latency, weakened immune responses, and development of antiviral resistance to ganciclovir, the only drug offered by the public health system in Brazil to treat the infection. The goal of this study was to identify mutations that may be associated with antiviral resistance in immunocompromised patients. METHODS: Molecular analysis was performed in 82 blood samples and subjected to genomic DNA extraction by a silica-based method. Three sequences of the HCMV UL97 gene, which encodes a phosphotransferase protein required for activation of ganciclovir, were amplified by polymerase chain reaction. Pyrosequencing methods were applied to one external 2096-bp segment DNA and two internal sequences between nucleotides 1087 to 1828 to detect mutations in this gene. RESULTS: Approximately 10% of sequences contained mutations between nucleotides 377 and 594, in conserved regions of the UL97 gene, leading to amino acid changes. Eleven coding mutations were identified, including changes leading to amino acid substitutions, E596K and S604F, which were observed in 100% of samples and are described for the first time in Brazil. In addition, one mutation (A594V) that is associated with ganciclovir resistance was detected in a kidney transplant patient. CONCLUSIONS: Further studies to detect mutations associated with HCMV resistance to antiviral drugs are required to demonstrate the need to increase the variety and availability of drugs used to treat viral infections in the public health care system in Brazil.

Perfil sorológico e molecular da infecção pelo citomegalovírus em pacientes transplantados de Belém-PA / Serological and molecular profiles of cytomegalovirus infection in transplant patients from Belém-PA

O citomegalovírus (CMV) é uma das principais causas de morbimortalidade de pacientes imunodeficientes. Em indivíduos transplantados, a infecção pelo vírus pode levar a rejeição aguda do enxerto, devido à produção de citocinas em resposta à infecção. Foi realizado o diagnóstico laboratorial da infecção pelo CMV em 35 pacientes transplantados renais através dos métodos ELISA e PCR no sangue, sendo acompanhados 14 indivíduos nos períodos pré e pós-transplante. As análises foram efetuadas no Instituto Evandro Chagas para confirmar o diagnóstico clínico da infecção viral e descrever o perfil sorológico-molecular dos pacientes. Dos 14 indivíduos avaliados no pré-transplante, 78,5 por cento apresentavam IgG e 7,1 por cento IgM para infecção por CMV. Na sorologia dos 35 pacientes no pós-transplante obteve-se 100 por cento de positividade para IgG e 14,5 por cento para IgM. Indivíduos soronegativos no pré-transplante soroconverteram após o enxerto com presença de IgG e IgM. Na análise molecular, 17,1 por cento apresentaram DNA viral, e os perfis sorológico-molecular foram: 2,8 por cento IgGpositivo IgMpositivoPCRpositivo; 14,3 por cento IgGpositivoIgMnegativoPCRpositivo; 8,6 por cento IgGpositivoIgMpositivoPCRnegativo e 74,3 por cento IgGpositivoIgMnegativoPCRnegativo. O perfil sorológico-molecular predominante é compatível com o perfil epidemiológico de elevada circulação do vírus na população. O conjunto IgGpositivoIgMnegativoPCRpositivo sugere a possibilidade de reinfecção por reativação viral em 8,6 por cento dos pacientes transplantados que pode ter sido da cepa exógena do doador para o receptor.

Uso da cultura de células em testes diagnósticos laboratoriais em medicina e biologia / The use of cell culture in laboratory diagnostic tests in medicine and biology

A cultura de células, iniciada nos primórdios do século XIX, vem sendo cada vez mais adaptada à manutenção do metabolismo fundamental celular in vitro, permitindo o desenvolvimento da maioria das funções fisiológicas básicas inerentes a uma célula e ao conjunto delas (tecido). A permanência da informação genética trazida do organismo que lhe deu origem, faz com que as células em cultura correspondam a um modelo biológico "vivo" para um número cada vez maior de testes laboratoriais aplicados aos campos da Medicina e da Biologia. O advento da Biologia Molecular e o esclarecimento do papel das células-tronco no desenvolvimento do organismo tornaram a cultura de células uma ferramenta fundamental na elucidação e solução de problemas, visando a melhoria da qualidade de vida dos indivíduos, como, também, o aprimoramento da manutenção de espécies animais e vegetais. Este trabalho tem o objetivo de mostrar a importância do uso das culturas de células, chamando a atenção para a biodiversidade intra e inter-específica, observada principalmente na região Amazônica, como também para a adptabilidade das células in vitro.

Diagnóstico molecular de infecção por citomegalovírus: relato de caso / Molecular diagnosis of cytomegalovirus infection: case report

Objetivo: descrever caso de citomegalia em uma paciente considerada, laboratorialmente, imune à infecção ,pelo citomegalovírus, cujo diagnóstico só foi possível através da análise da PCR (Polimerase Chain Reaction) no LCR. Método: para investigar o caso especifico de uma paciente com quadro clínico de paralisia de membros inferiores, perda da força muscular e hipotonia de membros superiores foram realizados três métodos diferentes: sorologia, isolamento viral e PCR. Coletadas três amostras de sangue e uma amostra de ,LCR. Realizou-se a pesquisa para o CMV e para os vírus da mononucleose, HTLV Coxsakievírus, poliovírus e ECHOvírus como diagnóstico diferencial. Resultados: através do teste de ELISA foi observada a presença de anticorpos IgG anti-CMV e ausência de IgM em todas as amostras de sangue testadas; as outras pesquisas virais forneceram resultados negativos,. efetuou-se o isolamento para o CMV apenas no LCR, não tendo sido observado o efeito citopático dentro de 25 dias de observação. A presença de DNA do CMV só ocorreu no LCR, a partir do qual foi possível confirmar o diagnóstico clínico da paciente como citomegalia. Conclusão: entre os métodos empregados para o diagnóstico da infecção pelo citomegalovírus, a PCR é a mais eficaz para os casos de infecções não primária

Estudo de saúde e exposiçäo ao mercúrio da comunidade Ribeirinha de Brasília Legal, Estado do Pará, Brasil / Health study and mercury exposure in the riverside community of Brasília Legal, Para State, Brazil

Apresenta os resultados de pesquisa desenvolvida na Comunidade Ribeirinha de Brasília Legal, Município de Aveiro, Estado do Pará, Brasil. A metodologia utilizada incluiu coleta de dados sobre aspectos epidemiológicos; avaliação clínica e determinação de níveis de mercúrio em amostras de peixes e tecido capilar humano. As determinações de mercúrio foram feitas por espectrofotometria de absorção atômica sem chama. A população estudada foi de 246 pessoas, com idade entre 1 e 74 anos. Os teores de mercúrio no cabelo alcançaram 49,99 mg/g e a análise de regressão linear mostrou associação (p<0.05) entre estes teores de mercúrio com a frequência de consumo semanal de peixes